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2016年影響ELISA試劑盒檢查要素
更新時間:2016-11-21   點擊次數(shù):1413次

ELISA試劑盒即酶聯(lián)免疫吸附實驗,是一種常用的固相酶免疫測定辦法。 因為ELISA辦法活絡(luò),特異性強不需要特殊設(shè)備,所以被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。但ELISA測定中影響要素較多,并且其操作中有一定的技能請求,在臨床查驗中除正常反響外,有時??梢姷揭恍┻^錯成果(即假陽性或假陰性)如標本的影響上海勁馬為我們解讀ELISA檢查的影響要素。
標本的影響
溶血標本及混有紅細胞的血清選用ELISA法檢查易發(fā)生假陽性。也許是溶血血清中富含過氧化酶物質(zhì)(紅細胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素),ELISA試劑盒在洗刷過程中往往難以*洗脫,它可使H2O2釋放出原生態(tài)氧(O),從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺生成可溶性的有色物質(zhì),即顯藍色,發(fā)生假陽性[2]。所以嚴重溶血標本禁用。
標本受細菌污染。因菌體中也許富含內(nèi)源性辣根過氧化物酶,因而,被細菌污染的標本同溶血標本一樣,亦可發(fā)生非特異性顯色而攪擾測定成果。
ELISA試劑盒標本保留不妥。在冰箱中保留過久的標本,在間接法ELISA測定中會致使本底過深、形成假陽性;為戰(zhàn)勝上述攪擾,ELISA試劑盒測定的血清標本宜為新鮮收集;如不能當即測定,5 d內(nèi)測定的血清標本可存放于4℃,1周后測定的血清標本應低溫凍存;凍存后融解的標本,蛋白質(zhì)有些濃縮,散布不均,應充沛混合后再測定,但混勻時應輕柔,不行激烈振動。
塑料試管能吸附抗原物質(zhì),樣本久置在塑料管內(nèi)會使樣本內(nèi)抗原含量降低形成假陰性。運用真空采血管;并運用非抗凝標本,肝素抗凝血漿會添加OD值,EDTA、酶抑制劑(如NaN3)可抑制ELISA體系中辣根過氧化物酶活性。
ELISA試劑盒標本凝結(jié)不全。 在工作中,有時為了爭取時間快速檢查,ELISA試劑盒常在血液還未開始凝結(jié)時即強行離心別離血清,使血清中仍殘留有些纖維蛋白原,在ELISA測定過程中能夠形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易形成假陽性成果;因而血液標本收集后有必要使其充沛凝結(jié)后再別離血清。

 

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